Ekspressionen og oprensningen af ​​LpxA af Chlamydia trachomatis

pfizeracademy

Ekspressionen og oprensningen af ​​LpxA af Chlamydia trachomatis og fremstilling af dets polyklonale antistof

 

Formålet med denne undersøgelse er at rense LpxA-proteinet fra Chlamydia trachomatis (Ct) og sammensætte det polyklonale antistof i modsætning til LpxA-protein for at lægge et grundlag for at lære funktionen af ​​LpxA-protein. LpxA-genet blev amplificeret ved PCR. Ekspressionsplasmidet pET28a-LpxA blev konstrueret ved anvendelse af pET28a, fordi vektoren. Fusionsproteinet indeholdende 6 histidinmærke blev induceret af IPTG og oprenset ved Ni2 + kromatografi gel.

Det oprensede His-LpxA-protein blev brugt som et immunogen til at immunisere newzealandske kaniner subkutant ved hjælp af det igen til at organisere polyklonalt antistof. Immunoblotting blev anvendt til at detektere responset mellem antistoffet og His-LpxA. Engagementet af polyklonalt antistof-titer blev påvist ved ELISA. Den relative molekylvægt af His-LpxA var 32. otte kDa, og det kan meget vel udtrykkes i Escherichia coli.

Renheden af ​​det oprensede protein var ca. 95%. Efter immunisering af newzealandske kaniner var antiserumet i stand til at anerkende det rekombinante His-LpxA-protein med en titer bedre end 1: 10240. Ved denne undersøgelse blev LpxA-protein effektivt oprenset, og antiserum var klar, hvilket tilbød et eksperimentelt fundament til at lære at betjene LpxA-protein.

Effektivitetsanalyse af det polyklonale anti-rabiesvirus ribonukleoprotein IgG-antistoffer produceret internt til brug ved direkte fluorescerende antistofkontrol

Fluoresceinisothiocyanat (FITC) -mærkede anti-rabiesvirus ribonukleoprotein (RNP) antistoffer kan anvendes som immunreagenser i direkte fluorescerende antistof-test (dFAT) til rabiesdiagnoser. Mens interne varer ofte bruges af laboratorier, er de fleste konjugater industrielle reagenser. Forretnings-anti-RNP-antistoffer er ikke desto mindre ude til analysefunktioner i Brasilien, ikke desto mindre, hvilket bidrager til den voksende brug af interne producerede antistoffer.

Overvejer, at konjugat af høj kvalitet kan påvirke resultaterne opnået gennem rabiesanalyse, forsøgte vi at undersøge effektivitetsbehovene for internt produceret polyklonalt anti-RNP IgG-FITC til software i dFAT. Til det mål er deres reproducerbarhed, diagnostiske følsomhed og specificitet blevet evalueret. Titeren af ​​polyklonalt anti-RNP IgG-FITC blev oprindeligt bestemt og evalueret af dFAT under anvendelse af prøver fra centralnervesystemet (CNS) fra forskellige dyrearter (hunde, katte, kvæg, heste, flagermus og ikke-humane primater).

Som vores vigtigste konsekvens nåede det polyklonale anti-RNP IgG-FITC en titer på 1: 30/1: 40 i dFAT med 100% diagnostisk følsomhed og specificitet. Som reproducerbarhed introducerede antistofferne, uanset fremstillingsbatch, de samme præstationer. Som konklusion viste det sig, at den egenproducerede polyklonale anti-RNP IgG-FITC var passende til påvisning af rabiesvirusantigen ved hjælp af dFAT.

Fremstilling af F (ab ‘) 2 fra monoklonale og polyklonale antistoffer

Antistoffer anvendes bredt i terapeutiske, diagnostiske og analysefunktioner, og antistofderivater ækvivalente med F (ab ‘) 2-fragmenter anvendes, når der kun kræves et specifikt antistofområde. F (ab ‘) 2 vil blive produceret ved hjælp af antistofteknik, men nogle funktioner kræver F (ab’) 2 produceret fra et unikt formuleret antistof eller straks fra en polyklonal antistofpulje.

Cysteinprotease-immunglobulin-nedbrydende enzym (IdeS) fra Streptococcus pyogenes fordøjer immunoglobulin G (IgG) især og effektivt for at tilvejebringe F (ab ‘) 2. Lige her elementerer vi fremstillingen og oprensningen af ​​rekombinant IdeS; dets anvendelse til at fordøje monoklonale eller polyklonale antistoffer mod F (ab ‘) 2-fragmenter; og F (ab ‘) 2-oprensning ved hjælp af på hinanden følgende affinitetskromatografitrin.

Den resulterende F (ab ‘) 2 udviser overdreven renhed, bevarer antigenbindende ydeevne og kan let anvendes i forskellige downstream-funktioner. © 2020 af John Wiley & Sons, Inc. Primær protokol: Fremstilling og oprensning af F (ab ‘) 2-fragmenter fra monoklonale og polyklonale antistoffer ved anvendelse af IdeS Alternativ protokol: Oprensning af polyklonale antigenspecifikke F (ab’) 2-fragmenter fra humant serum eller sekreter Assist Protocol: Fremstilling og oprensning af IdeS.

pfizeracademy

pfizeracademy

Analyse af flydende og pulveriserede typer af polyklonalt antistofpræparat i modsætning til Streptococcus bovis og Fusobacterium necrophorum hos kvæg skræddersyet eller ikke skræddersyet til ekstremt fermenterbare kulhydratdietter

Foderkomponenter, der ændrer vognfermentering, kan bruges til at stoppe metaboliske forstyrrelser svarende til acidose og optimere produktionen af ​​oksekvæg. Undersøgelsen evaluerede konsekvenserne af flydende og pulveriserede former for polyklonalt antistofpræparat (PAP) i modsætning til Streptococcus bovis og Fusobacterium necrophorum på gommentæringsparametre i ruminalkanylerede ikke-ammende malkekøer, der er skræddersyet eller ikke tilpasset et overdrevent fokusvægttabsprogram .En dobbelt 3 × 3 latinsk kvadratisk design blev brugt med tre PAP-midler (styring, pulveriseret og flydende PAP) og to tilpasningsprotokoller (skræddersyet, ikke-tilpasset; brugt til kvadratet)

Skræddersyede dyr er blevet overgået i to uger fra et foder til et 80% fokus vægttabsprogram, mens ikke-tilpassede dyr er blevet skiftet brat. Der er bemærket interaktioner mellem prøvetagningstid og tilpasning; 12 timer efter fodring havde den skræddersyede gruppe nedsat ruminal pH og bedre hele hurtigkædede fedtsyrekoncentrationer end den ikke-tilpassede gruppe, mens den anden blev bemærket efter 24 timer.

Acetat: propionatforhold, molær andel af butyrat og ammoniakkvælstoffokus har typisk været bedre i skræddersyet end ikke-tilpasset kvæg så meget som 36 timer efter fodring. Tilpasning fremmede 3,5 gange forskellige Entodinium-protozoer, men antallet af S. bovis- og Fibrobacter-succinogengener i rumens væske blev ikke påvirket.

Ikke desto mindre ændrede hverken flydende eller pulveriserede typer PAP rumenacidose-variabler i skræddersyede eller ikke-tilpassede dyr. Tilpasning af kvæg til ekstremt fermenterbare kulhydratdiet fremmede et ekstra sikkert ruminal miljø, men PAP var ikke effektiv til denne undersøgelse, hvor ingen dygtige akutte eller sub -akut vomme acidose.

Ged polyklonalt antistof I modsætning til samleje, der finder ud af område Y til separat X- og Y-kromosom, der bærer spermatozoer

Samleje antal sæd ved at adskille X- og Y-kromosom, der bærer sædceller, er afgørende for effektivt at erhverve det specificerede samleje med dyre afkom inden for husdyrhandelen. Målet med denne undersøgelse var at tilvejebringe et gedepolyklonalt antistof (pAb) i modsætning til det kvægs samleje, der regner ud område Y-kromosom (bSRY) for at adskille kvindelige og mandlige bærende sædceller. en feminin ged blev subkutant immuniseret med 27 kDa rekombinant bSRY (rbSRY) protein, fordi antigenet.

Anti-bSRY pAb blev oprenset ved ionbytningskromatografi. Renheden af ​​pAb blev bestemt ved anvendelse af SDS-PAGE-metoden. Den organiske øvelse af anti-bSRY pAb blev undersøgt under anvendelse af PCR til at evaluere bindingsaffiniteten af ​​pAb for bSRY-antigenet og kommercielt kønsbestemt tyresæd.

Den samlede mængde oprenset anti-bSRY pAb var ca. 650 mg / gedeserum (13 mg / ml). Mærkeligt bekræftede vores viden, at bindingsaffiniteten af ​​vores pAb til Y-lejringen var overdreven, mens den bindende affinitet af den til den X-kromosombærende sæd var ligesom den destruktive ledelse. Afslutningsvis viser vores resultater, at geden modvirker SRY pAb binder især til Y-kromosombærende sæd, der antyder dets potentielle anvendelse til samleje.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *