immunsorbentanalyse til musopløselig epoxidhydrolase-detektion ved

pfizeracademy

Vækst af en ekstremt delikat enzymkoblet immunsorbentanalyse til musopløselig epoxidhydrolase-detektion ved at kombinere et polyklonalt antistof med en Nanobody Tracer

 

Enzymbundne immunosorbentassays (ELISA) til påvisning af opløselig epoxidhydrolase (sEH), et nøgleenzym inden for metabolismen af ​​fedtsyrer og en biomarkør, kan mere og mere betyde en vigtig diagnostisk enhed. Ikke desto mindre mangler der ELISA’er til muse-sEH-kvantificering, hvilket fører til en flaskehals i forståelsen af ​​patogenesen af ​​mange lidelser forbundet med sEH primært baseret på musemoderne.

På dette arbejde er der opnået nanobodyer, der genkender muse-sEH, ved genoppanning i opposition til muse-sEH i ​​det tidligere fagudstillingsbibliotek af human sEH. Senere udviklede vi 4 ELISA’er, der involverede en blanding af anti-mus sEH polyklonale antistoffer (pAbs) og nanobistoffer. Det blev opdaget, at de dobbelte antistoffer arbejdede som dobbeltfiltre og havde stor indflydelse på hver følsomhed og selektivitet af sandwichimmunassays.

Udskiftningen fra anti-human sEH pAbs til anti-mus sEH pAbs førte til mere end 100 gange forstærkning inden for følsomheden, og en dramatisk lavere af detektionsgrænsen til et picogram pr. Milliliter varierer i format B (pAb / biotin-VHH / streptavidin-poly-peberrodsperoxidase). Desuden opdagede vi, at de 4 sandwich-ELISA’er muligvis ville vise strålende selektiviteter til mus sEH, uanset om antistofferne alene udviste vital krydsreaktivitet over for matrixen, hvilket indikerer den forbedrede selektivitet af dobbeltantistoffer som dobbeltfiltre.

I sidste ende blev ELISA (format B) for første gang effektivt brugt til at måle musens sEH-grad i de fleste kræftceller med ultralad overflod. De ELISA’er, der er foreslået lige her, betyder en delikat enhed til overvågning af sEH i ​​forskellige organiske processer og præsenterer ligeledes dyb indsigt i voksende sandwichimmunassays i modsætning til forskellige mål ved hjælp af hver følsomhed og selektivitet.

Forudsigelse af clearance af monoklonale og polyklonale antistoffer og ikke-antistofproteiner hos børn: Software til allometrisk skalering

Allometrisk skalering kan anvendes til ekstrapolering af farmakokinetiske parametre fra voksne til unge. Målet med denne forskning var at forudsige clearance af terapeutiske proteiner (monoklonale og polyklonale antistoffer og ikke-antistofproteiner) allometrisk hos for tidlige nyfødte til unge. Der har været 13 monoklonale antistoffer, syv polyklonale antistoffer og 9 terapeutiske proteiner (ikke-antistoffer) inden for forskningen.

Clearance af terapeutiske proteiner blev forudsagt ved anvendelse af den aldersafhængige eksponenter (ADE) mannequin, hvorefter i modsætning til de bemærkede clearanceværdier. Der har i alt været 29 terapeutiske proteiner på denne forskning med 75 observationer. Variationen af ​​observationer med ≤30%, ≤50% og> 50% forudsigelsesfejl var henholdsvis 60 (80%), 72 (96%) og tre (4%). Generelt var de forventede clearanceværdier for terapeutiske proteiner hos unge gode. Den allometriske teknik, der er foreslået på dette manuskript, kan bruges til at udvælge den første dosis hos terapeutiske proteiner i pædiatriske medicinske studier.

pfizeracademy

pfizeracademy

Prokaryot ekspression af PE8-protein fra Mycobacterium tuberculosis (H37Rv) og fremstilling af dets polyklonale antistof i kaniner

 

Målsætning om at klone prolin-glutamat 8 (PE8) -genafsnittet fra Mycobacterium tuberculosis (H37Rv), samle det rekombinante plasmid pET28a-PE8, kategoriske rekombinante PE8-protein og sammensætte dets polyklonale antistof. Strategier Ved hjælp af en typisk homolog rekombinationskloning-know-how klonede vi PE8-genet ind i den prokaryote vektor pET28a. Efter sekvensbekræftelse blev det omarbejdet til E. coli BL21 (DE3) og håndteret med 0,5 mmol / L isopropyl-beta-D-thiogalactopyranosid (IPTG) for at inducere proteinekspression.

Vi oprensede og renaturerede det rekombinante PE8-protein og immuniserede New Zealand-kaniner til at organisere det polyklonale antistof. Antistoftiter blev bestemt ved skrå ELISA, og specificiteten blev vurderet ved Western blot-evaluering. Resultater Det rekombinante plasmid pET28a-PE8 blev effektivt konstrueret, og PE8-proteinet blev primært udtrykt i en inklusionsfysik i E. coli. Efter renaturering og oprensning blev der opnået en renhed på ca. 90% af det rekombinante protein.

Titeren af ​​det polyklonale antistof blev forøget end 1: 430 080. Det polyklonale antistof kan især anerkende det rekombinante PE8-protein. Konklusion Vi har effektivt udtrykt og oprenset rekombinant PE8-protein, som kan bruges yderligere til at generere PE8 polyklonalt antistof med acceptabel titer og specificitet.

En foreløbig analyse af et indenlandsk produceret biotinyleret polyklonalt anti-rabies antistof til direkte hurtig immunhistokemisk kig på (DRIT) i Filippinerne

 

Rabies er en dødelig zoonotisk sygdom, der er endemisk i voksende lande i Asien og Afrika. For ikke så længe siden var den direkte hurtige immunhistokemiske kig på (DRIT) gavnlig af World Well Being Group (WHO) og World Group for Animal Well being (OIE) som en diagnostisk kig på rabies. Derefter blev et biotinyleret polyklonalt antistof (pAb) i modsætning til rabieslyssavirus (RABV) -nukleoprotein udviklet under anvendelse af en plasmid-cDNA-vaccine afledt af et almindeligt 11-tryk-problemvirus.

En foreløbig analyse af effektiviteten af ​​dette reagens til genkendelse af det filippinske RABV-tryk blev undersøgt under anvendelse af bankede hippocampusvævsprøver med DRIT, og resultaterne har været i sammenligning med dFAT. Resultaterne af acetone- og formalinfiksering på DRIT er yderligere blevet vurderet ved hjælp af immunoreaktivitetsscorer for prøverne.

Af de 142 undersøgte prøver undersøgte 104 konstruktive og 38 uønskede ved anvendelse af hver dFAT og DRIT og udviste 100% afvikling mellem de 2 diagnostiske procedurer. Desuden er der ikke bemærket falske konstruktive eller falske uønskede resultater ved anvendelse af acetone og formalinfiksering.

Således kan indenlandsk klar biotinyleret pAb fra plasmid cDNA anvendes til DRIT, især i ressourcebegrænsede laboratorier i Filippinerne. Ikke desto mindre burde disse resultater bekræftes med en ekstra grundig analyse af dette system, og påvisningsvarieringen skal evalueres yderligere i et større panel af dyreprøver og på forskellige lyssavira.

 

Acetylcholinesterase (AChE) polyklonalt antistof fra hybrid havkat (C. macrocephalus × C. gariepinus): Specifikation, følsomhed og krydsreaktivitet

AChE (acetylcholinesterase) er normalt mærket som en valgt biomarkør for pesticidreklame. Formålet med denne forskning var at tilvejebringe AChE polyklonalt antistof fra hybrid havkat, der er blevet afdækket til industrielt glyphosat. Hybrid havkat blev afdækket til glyphosat (0,75 ml / l) i 24 timer. Derefter blev fiskens sind dissekeret, AChE blev ekstraheret og oprenset ved hydroxyapatit-søjlekromatografi og elueret med 0,2 M kaliumphosphatbuffer pH 6,8. Denne protokol gav 70% udbytte.

Derefter blev sindekstraktet karakteriseret ved anvendelse af 10% SDS-PAGE og Western blot undersøgt med industrielt polyklonalt antistof, især mod AChE (PAb-AChE). Proteinet, 71 kDa, blev derefter brugt som et antigen til immunisering af mus til antistoffremstilling. Det polyklonale antistof (PAb) blev karakteriseret ved anvendelse af dot blot, Western blot og immunhistokemi til immunolokalisering af AChE i hybrid havkat afdækket til glyphosat.

Vi opdagede, at den egnede fortynding af antistof til hver prikblot og Western blot var 1: 3500 og 1: 2500 til immunhistokemi. Krydsreaktivitetstest bekræftede, at PAb-AChE kan anvendes med AChE fra stribet slangehovedfisk på den samme fortynding som brugt med AChE fra hybrid havkat.

Det blev konkluderet, at PAb især til hybrid havkat AChE fra dette arbejde var ekstremt speciel og delikat og muligvis krydsreagerede med stribet slangehovedfisk AChE. Dette polyklonale antistof kunne således også anvendes til overvågning af glyphosat-omtale i hybrid havkat og stribet slangehovedfisk.

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *